稳转细胞株丨细胞工程丨技术服务 - 北京镁伽科技有限公司

稳转细胞株

技术描述

稳转细胞株，是指通过慢病毒转染法将目的基因载体转入细胞中，根据载体所携带的某种筛选标记（抗性或荧光），预先摸索的适宜药筛浓度，筛选阳性克隆，进而可得到稳定表达的细胞株。稳定细胞株用于许多重要的应用，包括生物制品（如重组蛋白和单克隆抗体）生产、药物筛选和基因功能研究。

稳转细胞株筛选流程图

载体构建

细胞转染

药筛

阳性克隆的筛选与鉴定

单克隆扩增及冻存

交付内容和服务周期

项目名称	细胞类型	周期（周）	交付内容
基因干扰	细胞系	7-9	稳转细胞株和结题报告
	促销细胞系	8-12	稳转细胞株和结题报告
	常规细胞系	9-14	稳转细胞株和结题报告
基因过表达	细胞系	7-10	稳转细胞株和结题报告
	促销细胞系	8-12	稳转细胞株和结题报告
	常规细胞系	9-15	稳转细胞株和结题报告
细胞系：293T，HCT116；促销细胞：Hela，CHO，Nero2A，A549

常见问题解答

1、花费时间和经费构建稳定细胞株有必要吗？

如果您需要对过表达或者表达降低目的基因的细胞进行反复试验，那么构建稳定细胞株是有必要的。
（1）可以减少不同批次实验中转染效率差异带来的实验结果差异，提高实验的可重复性。
（2）构建好细胞系后不必再进行瞬时转染实验以及反复制备质粒，减少工作量。
（3）不再使用价格高昂的转染试剂，节约实验成本。
2、所有的细胞株都可以构建稳定细胞系吗？

不是的。构建稳定细胞系需要满足2个条件：
（1）细胞能稳定传代；
（2）细胞的转染效率满足要求。我们提供预实验服务，测试您的细胞株是否能用于稳定细胞系构建。
3、你们用什么方法构建稳定细胞株呢？

我们是用慢病毒转染的方法构建稳定细胞株的。该系统的特点是目的基因先整合到基因组上再表达，没有瞬时表达过程。因此筛选出的细胞都是稳定整合的。
4、目的基因能稳定表达几代？是否提供传代稳定性数据？

慢病毒系统的特点决定了目的基因会像细胞自身基因一样一直表达，不会在传代过程中丢失。我们可以提供10代、15代传代稳定性检测，但需要收取额外费用。
5、构建好的稳定细胞系如何培养和保存？

我们提供的单克隆和多克隆细胞系培养和保存，均与原来的细胞株无异，无需抗生素维持。
6、单克隆和多克隆细胞株的区别是什么？

单克隆细胞是转染目的基因后经过克隆筛选得到的，由一个细胞扩增形成的细胞株，目的基因整合的位置和拷贝数都是一致的，可以长期维持表达量不变。多克隆细胞是转染目的基因后直接经抗药基因筛选得到的。是多种阳性细胞克隆的混合。
7、如何选择合适的慢病毒载体？

选择慢病毒载体主要需要考虑启动子选择、是否需要荧光蛋白标签、荧光蛋白标签是否需要融合表达。常用的慢病毒有pLV-puro，pLV-EGFP-C，pLV-EGFP（2A）puro。
8、构建细胞株需要多长时间？

一般多克隆细胞株需要1个半月左右，单克隆细胞株需要2-3个月时间。
9、提供的实验报告包括什么？

细胞株构建实验报告、目的基因Realtime-PCR检测报告、含有荧光蛋白的细胞提供细胞荧光照片。如果需要提供Western-Blot检测服务，需要您提供一抗并收取额外费用。

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