细胞增殖与活性检测丨药物发现丨技术服务

细胞增殖与活性检测

CCK-8

CCK-8检测是一种基于SST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测。其主要成分为水溶性四唑盐SST-8（2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2，4-二磺基苯）-2H-四唑单钠盐），SST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性的甲臜。SST-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。由于CCK-8溶液非常稳定并且细胞毒性很小，所以可以进行长时间孵育，可用于细胞增殖测定、细胞毒性的检测、药物筛选以及细胞生长抑制检测等。

刃天青（resazurin）

细胞活力检测法刃天青resazurin中的氧化还原指示剂在代谢活性细胞中被转化为荧光和比色报告分子试卤灵resorufin，可作为非常可靠且灵敏的细胞活力/细胞毒性指示剂。

DNA合成检测分析

EdU（5-Ethynyl-2’-deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子中，通过基于EdU与荧光染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性，可以用于荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、多功能酶标仪检测，也可以用于高内涵筛选，适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。

LDH法细胞毒性检测

乳酸脱氢酶（LDH）是一种非常稳定的细胞质酶，存在于正常细胞的胞质中，一旦细胞膜受损，LDH即被释放到细胞外；LDH催化乳酸形成丙酮酸盐，和INT（四唑盐类）反应转化成红色甲臜化合物，可通过酶标仪进行检测。颜色形成的量与裂解细胞的数目成正比。该实验方法操作简便、快速，可应用于CTL和NK细胞活性测定及药物、化学物质或放射所引起的细胞毒性。

荧光染料细胞活性检测

在所有现有的荧光染料中，荧光素二乙酸酯（FDA）及其衍生物（如CFSE）是非荧光分子，其扩散到细胞中并被细胞内非特异性酯酶水解以产生荧光。荧光产物仅在具有完整细胞膜和活性酯酶活性的细胞中产生和积累，荧光产物会跟随细胞分裂，被平均分配到子细胞中。进一步可用流式细胞仪分析细胞分裂增殖的情况，还可以通过细胞完整性对活死细胞分别进行标记。

台盼蓝细胞计数检测

台盼蓝染料是一种重要的染色剂，可以将死组织或死细胞染成蓝色而具有完整细胞膜的活细胞或组织却不着色。由于细胞在通过膜的化合物中具有很高的选择性，因此在活细胞中，台盼蓝不被吸收；但可以穿过死细胞中的膜。因此，死细胞在显微镜下显示为独特的蓝色。用于辨别区分死细胞和活细胞，以及检测细胞膜的完整性。

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