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CRISPR文库筛选
处在科学研究前沿的CRISPR-Cas9基因编辑技术因其能快速、简便、准确地实现靶基因的敲除、敲入、激活或者干扰等基因编辑功能而成为一种强大的遗传筛选工具,目前已经在各种类型细胞系和多种模式生物中得到大规模筛选运用。通过CRISPR系统构建全基因组CRISPRi文库进行高通量筛选,使研究人员能够便捷地开展全基因组筛选,能更好筛选出肿瘤对免疫疗法做出应答的潜在靶标基因,从而较高效率地研究靶标基因功能和加速细胞免疫疗法的研究开发。
CRISPR文库筛选技术包括gRNA文库设计、gRNA oligo合成、gRNA文库构建、gRNA文库递送和功能性筛选、NGS测序以及下游数据分析。相比与RNAi文库技术,CRISPR文库筛选技术能够充分破坏基因的功能,且脱靶性较低,因此CRISPR文库筛选技术的应用功能更加强大。
siRNA文库筛选
siRNA,即小干扰RNA分子。siRNA文库筛选技术适用于真核生物体内基因功能缺失的研究,它能持久有效高特异性的控制基因的表达,能够靶向沉默某个完整的代谢途径、信号通路和基因家族等。在药物发现中,通过靶标进行全基因组筛选,siRNA文库可以一次实验即可分析上百个基因,以芯片的形式筛选成百上千个药物靶点,实现高通量检测,加速药物的研发并对疾病的分子机理有更深入的了解。基于siRNA文库的高通量筛选流程主要包括siRNA文库初筛、根据初筛结果挑选有效基因的siRNA进行复筛以及根据复筛结果挑选干扰效应较强稳定的基因进行下游功能验证实验。
NGS单细胞测序
随着高通量测序技术的发展,已经可以在单细胞水平对基因进行有效的研究。单细胞测序技术的出现,使得人们可以在单个细胞水平上深入探索研究基因组学、转录组学以及表观基因组学的特征。单细胞测序技术主要包括单细胞的分离制备、遗传物质的提取扩增以及遗传物质的高通量测序等三方面。在转录组学研究中,以往测序的样本通常是组织样本或者是细胞群,测序得到的RNA转录本是细胞之间的平均值,有特定功能细胞的RNA转录本没有得到很好表征。而单细胞转录组测序能够很好分析每个细胞的RNA转录表达谱,提供细胞间变异的高分辨率视图,并鉴定异质细胞群中特异的稀有细胞。通过单细胞转录组测序技术,科研人员能够研究复杂组织中单个细胞的不同生物学特性,了解不同的细胞亚群及其生物学功能,从而在细胞和分子水平进行更加精细的研究分析。单细胞测序技术已经广泛应用于肿瘤细胞的异质性研究、肿瘤细胞的克隆进化、相关新标记物的发现、肿瘤微环境、发育生物学、细胞调控网络互作、免疫学和神经科学等领域。
生信分析
生物信息学分析是指在生命科学的研究中,通过高性能计算机对实验采集到的数据和生物信息进行储存、检索和综合分析。生信分析的研究主要体现在基因组学和蛋白质组学两方面,也就是从核酸序列和蛋白质序列出发,分析序列变异以及结构功能的差异所代表的生物学研究意义。Scilia目前已经搭建完整的生信分析平台,能够较高的效率下准确分析多种高通量测序组学数据,包括全基因组、全外显子组、转录组和表观遗传组等组学数据。
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