免疫定量分析平台丨技术平台 - 北京镁伽科技有限公司

免疫定量分析平台

高通量FACS

流式细胞仪（flow cytometer）又称荧光激活细胞分选器（FACS，Fluorescence Activated Cell Sorter），是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代较为先进的细胞定量分析技术之一。

美国BD公司推出的FACS Array生物分析仪。这一仪器光学系统配置了532nm绿色激光器和635nm红色激光器，可以检测2个散色光信号和4个荧光参数。由于整合了96孔板上样技术和数字化电子系统，使得样本采集的速度达到15000个/秒，尤其适用于高通量筛选，比如快速的、高通量的信号检测和细胞分析。

这一仪器由检测分析仪、电脑工作站、系统软件和CBA软件组成，具有自动化程度高，速度快，灵敏度高等特点，其速度可将处理一块96孔板所需时间减少至35分钟，而且其灵敏度和动力学范围保证了2.5um-50um的微球检测，散射光信号可以清晰分辨淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞。

多光谱FACS

光谱流式细胞术是一种基于常规流式细胞术的技术，其中光谱仪和多通道检测器（通常为CCD）代替了常规系统中的传统反射镜，滤光器和光电倍增管（PMT）。主要用于识别高自发荧光或关键生物标志物表达水平低的细胞群。

Cytek是光谱流式细胞仪主要代表品牌，是全球唯一能实现一管样本40色以上检测分析的流式细胞仪，成为高端多色流式领域的唯一选择。以Cytek为代表的全光谱流式细胞仪使用CWDM技术来分光，从应用PMT技术提升为雪崩光电二极管（Avalanche photodiode，APD）芯片技术来完成光电转换。通过引入光通讯领域的光信号处理技术，Cytek流式细胞仪能够采集全光谱信号，利用强大的软件算法，对高维数据进行降维或聚类分析，从根本上避免了荧光光谱重叠所导致的补偿问题，可以提供20-50色多参数分析。

多色免疫荧光

单色免疫荧光得到的往往是孤立的成果，而多色分析可以了解细胞之间的相关性。Beckman公司的CytoFLEX平台流式细胞仪在六种激发波长（355 nm、375 nm、405 nm、488 nm、638 nm、808 nm）下表现出很好的灵敏度和重现性。CytoFLEX是市场上唯一能够检测80nm聚苯乙烯珠粒的细胞仪。可用于分离和分析血液或培养细胞、细菌、藻类、酵母、微粒，甚至像细胞外囊泡这样的纳米颗粒。

CytoFLEX LX流式细胞仪是CytoFLEX平台的延伸产品。此型号采用多达6个激光和21个颜色参数扩展研究的可能性。六个空间分离的激光可以让面板在整个光谱中扩散，减少串扰和光谱重叠。目前有两个系列可用，即紫外线-紫-蓝-黄绿-红-红外线（U-V-B-Y-R-I）系列和近紫外线-紫-蓝-黄绿-红-红外线（U-V-B-Y-R-I）系列。

Luminex

目前运用Luminex xMAP技术进行临床诊断和基础研究成为生命科学研究领域的一大热点，Luminex系统可以全面进行各种single plex或multiplex多形式的细胞因子检测和生物标志物检测。Luminex 200系统主要用于体外检测，该系统专门用于进行多种基于xMAP技术的实验室测试，检测xMAP微球表面的生物分子反应，可以同时对单个测试样本中的多达100个分析物进行分析。

Luminex 200生物分析技术平台结合了磁珠/非磁珠多重反应体系、分析软件、技术支持，可提供一个完整的快速、精确的生物标记定量平台。该系统由激光系统、光学系统、液流系统、液流控制系统以及先进的数字处理系统和高通量XY平台组成，提供一整套先进的、完整的液相芯片检测平台。它应用微球和流式细胞仪的原理，微球内部含有三种免疫荧光，通过荧光不同的比例可以区分500种不同的微球。每种微球可以用来检测一种不同的蛋白或基因。因此利用微球技术可以同时检测高达500个蛋白或基因。Luminex可以用于细胞因子、多重病原体和肿瘤生物标志物检测。