靶点结合分析检测丨药物发现丨技术服务

靶点结合分析检测

HTRF

均相时间分辨荧光技术（homogeneous time－resolved fluorescence），是一种用来检测纯液相体系中待测物的技术。该技术基于荧光共振能量转移（FRET，Fluorescence resonance energy transfer）和时间分辨荧光（TRF，Time-Resolved Fluorescence）两大技术。将TRF的低背景特点和FRET的均相实验方式融合在一起，使得实验灵活可靠、灵敏度高、通量大、假阳性低。在HTRF实验中，当供体和受体相离很近时，会有荧光共振能量转移而产生信号。

HTRF的能量供体是铕（Eu）和铽（Tb）的穴状化合物。在这个穴状化合里，Eu和Tb被长期地嵌合在一个笼子里，结构非常稳定。HTRF的能量受体也有两种，XL665和d2。

HTRF技术被广泛应用于细胞实验，并应用于药物研发的不同阶段，从实验方法的建立、高通量筛选、lead到hit、到临床前研究，这是一种很灵敏且稳定的技术。自从该技术进入药物研发领域以来，加快了很多研究的步伐。包括GPCR（受体配体结合、cAMP和IP-1的检测、磷酸化ERK的定量等）、激酶、抗体研究等。此外，该技术也适用于蛋白和蛋白、蛋白和多肽、蛋白和DNA/RNA相互作用的实验。

GPCR药物筛选与分析

G蛋白偶联受体（Gprotein-coupledreceptor，GPCR）约有800-1000个成员，是迄今发现的较大的多药物靶点的受体超家族，其激动剂或拮抗剂常被用于治疗各种疾病，在药物研发中扮演者重要角色。Scilia能够为客户提供GPCR药物筛选和发现服务。可以根据客户提供的化合物库和构建的GPCR靶点细胞系依托于高通量（HTS）筛选技术进行GPCR结合分析和IC50检测。结合是GPCRs发挥功能的第一步，对其亲和力的测定是药物研发不可缺少的部分。GPCR结合实验可以进行配体结合分析，受体与配体分别被荧光基团标记，结合后可激发产生能量转移（FRET）信号，进而计算IC50、Ki、Kd等参数，主要检测化合物与目标靶点的结合能力。GPCR功能分析试验可以对钙流、第二信使（cAMP、IP-1）等相关功能性分析试验，分析化合物对靶点的激活和抑制作用。

激酶药物筛选与分析

激酶（Kinase）包括蛋白激酶、磷酸酶和磷酸二酯酶。蛋白激酶是通过共价调节的方式将磷酸基团转移到其他蛋白上发挥功能的，从高能供体分子（如ATP）转移磷酸基团到特定靶分子（底物）的酶，这一过程谓之磷酸化。它们是激酶药筛靶点分子中重要的一类。激酶介导的信号传导途径的异常调节是造成人类主要病理状况的原因，例如癌症、心血管疾病、神经退行性疾病和代谢紊乱。因而，激酶上述的特征使其成为药物研发和筛选中的重要靶点。Scilia根据客户提供的待测靶点化合物，开展相应的筛选和检测服务。细胞内的激酶，在药物的作用下，发挥催化活性，引起细胞内的蛋白变化，通过各种检测方法，探讨药物的作用机理。检测方法：激酶稳定细胞系构建，激酶活性评价，化合物结合试验，蛋白互作检测等。

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