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CRISPR/cas9基因编辑
技术服务
基因敲除
CRISPR基因编辑技术
CRISPR-Cas9目前已经成为生命科学领域炙手可热的研究工具。CRISPR-Mega是Scilia在CRISPR-Cas9系统基础上自主开发的基因编辑技术,Scilia提供以CRISPR-Mega技术为基础定制的细胞系,包括基因敲除细胞系、基因敲入细胞系、基因编辑点突变细胞系和CRISPR质粒构建服务。CRISPR-Mega对从gRNA设计、载体构建、到单克隆筛选的各个流程进行优化,使得基因编辑效率显著优于行业水平。同时结合Scilia自主研发的自动化细胞培养与筛选系统,可实现在多种复杂细胞系中较高效率的基因敲除、敲入、突变等基因编辑技术。

CRISPR/Cas9是一种基于细菌天然免疫机制开发的基因编辑技术。经简化改造的CRISPR系统由核酸内切酶Cas9和gRNA(Guide RNA,gRNA)两部分组成。Cas9能识别并结合基因组上的原间隔序列临近基序(Protospacer adjacent motif,PAM)并形成DNA双链解旋,如此时gRNA的crRNA部分能与PAM上游序列成功互补配对,Cas9将激活其核酸内切酶活性,在PAM上游特定位置形成双链DNA断裂(Double strand break,DSB)。DSB可激活细胞的DNA损伤修复机制,非同源性末端结合(Non-homologous End Joining,NHEJ)或同源重组介导的修复(Homologydirected repair,HDR)。NHEJ,即易错修复,会在修复位点引起随机插入或缺失,造成移码突变,使得基因不再表达,由此形成基因敲除。HDR,即同源重组修复,能借助外源引入的单链或双链DNA为模板介导基因替换或插入,这种方式可以将一段DNA序列准确地插入特定的基因组位点,由此完成基因敲入或替换。
基因敲除
通过化学转染法、电转法或脂质体介导法将gRNA和Cas9转入细胞中,根据转染方法不同进行不同时长的药筛,药筛完成后挑选单克隆培养。选择不同的克隆分别进行靶位点扩增及测序验证,筛选出基因敲除的阳性克隆。
基因编辑技术流程
细胞检测及培养
提供细胞检测报告
质粒构建
提供质粒构建报告,包括靶点测序结果
载体转染细胞
单克隆筛选及扩增
阳性克隆鉴定
交付
完整项目报告及原始实验数据
CRISPR-Mega技术优势

CRISPR-Mega技术
CRISPR-Mega结合实验室自主研发的自动化细胞培养与筛选系统,可实现在多种复杂细胞系中较高效率的基因敲除基因编辑操作

成熟的基因编辑平台
已成功在多种复杂细胞系上实现基因编辑,提供从方案到结果的一站式服务

专业的技术方案团队
专业博士带领的解决方案团队一对一方案设计,技术纯熟的实验人员从预实验到阳性鉴定全程严格操作,以保证高质量的结果交付

周期短,性价比高
CRISPR-Mega技术周期短,基因敲除项目8-10周拿到阳性单克隆,价格优惠
交付内容和服务周期
基因编辑技术 交付内容 交付时间
基因敲除 目标基因敲除的纯合单克隆细胞株
gRNA序列和目标区域测序报告
8-10周
基因敲入 目标位点敲入的纯合单克隆细胞株
gRNA序列和同源臂序列以及目标区域测序报告
10-14周
基因点突变 目标位点突变的纯合单克隆细胞株
gRNA序列和同源臂序列以及目标区域测序报告
10-16周
过表达细胞株 目标基因的纯合单克隆细胞株
gRNA序列和目标区域测序报告
10-12周
CRISPR-Mega基因编辑的应用领域
基于CRISPR高效、简便的基因编辑技术,我们的服务可广泛应用于生物学研究各个领域。
  • 基因功能发现
    对内源基因进行特异性地敲除或敲入后进行表型分析。
  • 信号通路分析
    对信号通路中的蛋白进行扰动或加入标记,探索信号通路中蛋白作用的上下游关系。
  • 蛋白改造与优化
    为蛋白加上标签或特定序列,优化筛选功能蛋白,探索蛋白间相互作用。
  • 抗体验证
    通过敲除或突变可以筛除抗体非特异信号导致的假阳性。
  • 疾病模型构建
    建立疾病突变的细胞模型或动物模型,进行药物筛选或功能机理研究。
常见问题解答
  • 1、CRISPR基因编辑实验如何选择合适的递送体系?
    取决于实验目的和细胞系的类型。易转染的细胞系建议选择质粒;转染效率低的细胞系建议选择病毒;期望达到更高的编辑效率、毒性更低的效果可以选择sgRNA+Cas9蛋白的递送系统。
  • 2、在对载体进行测序来确认插入片段是否插入且序列正确时碰到问题,该怎么办?
    建议使用高质量的、纯化的质粒DNA进行测序,向测序反应中加入DMSO至终浓度5%;提高用于测序反应的模板量,可提高至通常浓度的两倍;在测序反应中使用7:1摩尔比的dITP:dGTP。
  • 3、进行细胞基因编辑,如何提高细胞的转染效率?
    高转染效率是获得高效基因编辑效率的必要条件,高质量的转染试剂有助于实现各种细胞类型,包括干细胞和原代细胞的高效率、低毒性转染,从而提高Cas9蛋白剪切和基因重组效率。对于转染试剂难以达到理想转染效果的细胞,推荐使用电转、显微注射等方式,同时需要优化具体实验条件。
  • 4、CRISPR实验中转染或导入效率低怎么优化?
    选择不同的转染试剂、不同的电转条件和不同的病毒感染条件等方面,进行测试实验。
  • 5、基因编辑实验,直接导入Cas9蛋白,还是用质粒DNA编码Cas9蛋白,哪个效果更好?
    直接使用Cas9蛋白的优势包括:提高编辑效率,RNP中Cas9蛋白与sgRNA复合物结合率更高、更稳定;降低脱靶效应,可能受其它因素干扰使质粒持续表达,而Cas9蛋白与sgRNA是非持续表达,结合后转导入宿主细胞,避免切割非靶序列;无DNA干扰,质粒DNA可能随机插入宿主DNA的断裂处;无免疫原性:Cas9蛋白较之质粒,不易引起宿主细胞免疫反应。
联系信息
电话:400 0601 021
邮箱: officialmail@scilia.com
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